細菌的分解代謝產(chǎn)物因各種細菌具備的酶不完全相同,而有所差異。各代謝產(chǎn)物可通過生化試驗的方法檢測,通常稱為細菌的生化的反應(yīng)。
1.糖代謝測定
(1)糖發(fā)酵試驗:細菌對各種糖的分解能力及代謝產(chǎn)物不同,可借以鑒別細菌。一般非致病菌能發(fā)酵多種單糖,如大腸桿菌能分解葡萄糖有乳糖,產(chǎn)生甲酸等產(chǎn)物,并有甲酸解氫酶,可將其分解為CO2和H2,故生化反應(yīng)結(jié)果為產(chǎn)酸產(chǎn)氣,以“⊕”表示。傷寒桿菌分解葡萄糖產(chǎn)酸,但無解氫酶。故生化結(jié)果為產(chǎn)酸不產(chǎn)氣,以“+”表示。傷寒桿菌及一般致病菌大都不能分解乳糖,以“-”表示。
(2)VP試驗:大腸桿菌與產(chǎn)氣桿菌均分解葡萄糖⊕,為區(qū)分兩菌可采用VP試驗及甲基紅試驗。產(chǎn)氣桿菌能使丙酮酸脫羧、氧化(在堿性溶液中)生成二乙酰,后者可與含胍基的化合物反應(yīng),生成紅色化合物,稱VP陽性。大腸桿菌分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸,VP陰性。
(3)甲基紅試驗:產(chǎn)氣桿菌使丙酮酸脫羧后形成中性產(chǎn)物,培養(yǎng)液pH>5.4,甲基紅指示劑呈桔黃色,為甲基紅試驗陰性,大腸桿菌分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸,培養(yǎng)液呈酸性pH<5.4,指示劑甲基紅呈紅色,稱甲基紅試驗陽性。
(4)枸櫞酸鹽利用試驗:能利用枸櫞酸鹽作為唯一碳源的細菌如產(chǎn)氣桿菌,分解枸櫞酸鹽生成碳酸鹽,同時分解培養(yǎng)基的銨鹽生成氨,由此使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性,使指示劑溴麝香草酚藍(BTB)由淡綠轉(zhuǎn)為深藍,此為枸櫞酸鹽利用試驗陽性。、
2.蛋白質(zhì)代謝測定
(1)吲哚試驗:含有色氨酸酶的細菌(如大腸桿菌、變形桿菌等)可分解色氨酸生成吲哚,若加入二甲基氨基苯甲醛,與吲哚結(jié)合,形成玫瑰吲哚,呈紅色,稱吲哚試驗陽性。
(2)硫化氫試驗:變形桿菌、乙型副傷寒桿菌等能分解含硫氨基酸如胱氨酸、甲硫氨酸等,生成硫化氫。在有醋酸鉛或硫酸亞鐵存在時,則生成黑色硫化鉛或硫化亞鐵,可借以鑒別細菌。
3.尿素分解試驗
變形桿菌具有尿素酶,可分解尿素產(chǎn)生氨,培養(yǎng)基呈堿性,以酚紅為指示劑檢測呈紅色,由此區(qū)別于沙門氏菌。
吲哚(I)、甲基紅(M)、VP(V)、枸櫞酸鹽利用(C)四種試驗,常用于鑒定腸道桿菌,合稱之為IMViC試驗。大腸桿菌呈“++——”,產(chǎn)氣桿菌為“——++”。
氣相、液相色譜法通過對細菌分解代謝產(chǎn)物中揮發(fā)性或不揮發(fā)性有機酸和醇類的檢測,可準確、快速地確定細菌的種類,是目前進行細菌生化鑒定的高新技術(shù)。
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